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FISH检测子宫颈脱落细胞hTERC基因的表达及意义
关键字：基因,表达,意义,细胞,检测,子宫,IJ,KL,GH,EF, 发布时间：2011-08-21

第３０卷第４期 ２０１０年８月 赣南医学院学报 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＡＮＮＡＮＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ％Ｚ．３０＾幻．４ ４ＵＧ．２０１０ ＦＩＳＨ检测子宫颈脱落细胞ｈＴＥＲＣ基因的表达及 ｊｋ’、，。 思Ｘ 卢义生’，冼丽英１，侯智勇１，刘 军１，陈国明１，韩淑珍２，赵继红１，罗淑贞１，陈建华１ （１．东莞市人民医院；２．东莞市厚街医院，广东东莞５２３０００） 摘要：目的：探讨人类３号染色体端粒酶（ｈＴＥＲＣ）基因在宫颈上皮内瘤变（ＣＩＮ）患者的表达及临床意义。方 法：收集２００８年１月至２００８年ｌｏ月东莞地区１００例宫颈脱落细胞标本，其中ＣＩＮ患者６３例、宫颈鳞癌（ＳＣＣ）患 者７例、正常细胞学或炎症妇女３０例，用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法检测宫颈脱落细胞ｈＴＥＲＣ基因。结果：在 ＣＩＮＩ、ＣＩＮⅡ／Ⅲ和ＳＣＣ患者宫颈脱落细胞中ｈＴＥＲＣ基因的表达率分别是１５．１５％、８９．６７％和１００％。ＧＩＮＩ、 ＣＩＮⅡ／Ⅲ和ＳＣＣ组与正常组比较，ｈＴＥＲＣ基因阳性率差异有显著统计学意义（Ｐ＜Ｏ．００１），其中，ＣＩＮＩ与ＧＩＮＩＩ／ Ⅲ比较，ＣＩＮⅡ／Ⅲ与ＳＣＣ比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。随着病变程度增加，ｈＴＥＲＣ基因表达率增加。 ｈＴＥＲＣ基因检测ＣＩＮⅡ／ＩＩＩ的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为８６．６７％、９２．０６％、８３．８７％和 ９３．５３％。ＣＩＮ和ＳＣＣ组病例与正常或炎症组比较，ｈＴＥＲＣ基因扩增比例增加，可观察到明确的超二倍体现象。 ｈＴＥＲＣ基因的表达水平与宫颈病变的程度关系密切。结论：ｈＴＥＲＣ基因在ＣＩＮ和ＳＣＣ中表达异常，随着病变程 度增加其阳性率增加，可作为宫颈病变恶性进展的监测标志。 关键词：荧光原位杂交；端粒；染色体末端转移酶；宫颈上皮内瘤变 中图分类号：Ｒ４４６．１ｌ＋３文献标志码：Ａ文章编号：１００ｌ一５７７９（２０ｌｏ）０４—０５３３—０４ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｇｅｎｅｉｎｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅｃｙｔｅｓｏｆｃｅｒｖｉｘ ＬＵＹｉ?ｓｈｅｎｇ，ＸＩＡＮＬｉ?ｙｉｎｇ，ＨＯＵＺｈｉ?ｙｏｎｇ。ｅｔａｌ （ＤｏｎｇｇｕａｎＰｅｏｐｌｅ§Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｄｏｎｇｇｕａｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５２３０１８） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｆｆｉｇｎｉｆｌｃａｎｃｅｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒｕｓｅｇｅｎｅ（ｈＴＥＲＣ）ｉｎｔｈｅｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｅｙｔｅｓｏｆｃｅｒｖｉｘｂｙｄｕａｌ—ｃｏｌｏｒｉｎｔｅｒｐｈｕｓｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｉｇｎａｌｉｎ ｔｈｅｃｅｌｌｓＷｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇｉｎｔｅｒｐｈａｓｅＦＩＳＨ．Ｗｅｃｏｌｅｅｔｅｄ１００ｓｐｅｃｉｍｅｎｓｉｎＤｏｎｇｇｕａｎｇｆｒｏｍＪａｎｕａｒｙ，ｔｏＯｃｔｏｂｅｒｏｆ ２００８ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈＴＥＲＣｇｅｎｅｉｎｃｅｌｌｓｆｒｏｍ６３ｃｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｔｈｅｌｉａｌｎｅｏｐｌａｓｉａ（ＣＩＮ），７ｓｑｕａｍｏｕｓｅ／ｌｒ－ ｃｉｎｏｍａｓｏｆｔｈｅｃｅｒｖｉｘ（ＳＳＣ）ａｎｄ３０ｎｏｍａｌｃｅｒｖｉｘ ｏｒｃｈｒｏｎｉｃｅｅｒｖｉｃｉｔｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＰｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｓｏｆｔｈｅｈＴＥＨＣ ｇｅｎｅｉｎＣＩＮＩ、ＣＩＮＩＩ／ｌｌＩａｎｄＳＳＣｗｅｒｅ１５．１５％，８９．６７％ａｎｄ１００％．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｃｅｒｖｉｘ ｏｒｃｌＬｒｏｍｃｅｏｎｖｉｃｉ． ｔｉｓ，ｈＴＥＲＣｇｅｎｅｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＣＩＮａｎｄＳＳＣｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．００１）．Ｔｈｅｒｅｗａｓ ａｓｉｇｎｉｆｌｃａｎｄｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎＣＩＮＩａｎｄＣＩＮＩ／ｍ（Ｐ＜０．０５），ａｌｓｏｂｅｔｗｅｅｎＣＩＮＩ／ⅢａｎｄＳＳＣ。Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｏｆｔｈｅ ｈＴＥＲＣｇｅｎｅｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ、ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ、ｐｏｓｉｔｉｖｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｖａｌｕｅａｎｄｎｅｇａ— ｔｉｒｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｖａｌｕｅｏｆｈＴＥＲＣｇｅｎｅｗｈｉｃｈｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎＣ１ＮＩＩ／Ⅲｗｅｒｅ８６．６７％、９２．０６％、８３．８７％ａｎｄ９３．５３％ｒｅａｐｅｅ－ ｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｒａｔｅｏｆｈＴＥＲＣｇｅｎｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎＣＩＮａｎｄＳＳＣ．Ｗｅｏｂ— ｓｅｌｗｅｃｌｈｙｐｅｒｄｉｐｌｏｉｄｃｅｌｌｉｎＣＩＮａｎｄＳＳＣ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｈＴＥＲＣｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅＳＣＣａｎｄＧＩＮｓｕｇ－ ｇｅｓｔｓｔｈａｔｈＴＥＲＣｇｅｎｅ眈ｒｖｅｓ ａｓ ａｓｃｒｅｅｎｉｎｇｔｅｓｔｍａｒｋｅｒｆｏｒｈｅｌｐｉｎｇｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｅ? ｓｉｏｎｓ． ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ；ｃｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｎｅｏｐｌａｓｉａ 宫颈癌是女性最常见的第二位恶性肿瘤，早期 诊断和治疗能改善患者预后。大部分低度宫颈上皮 内瘤变（ｃｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｎｅｏｐｌａｓｉａ，ＣＩＮ）能自 然消退，仅少部分ＣＩＮｌＩ／Ⅲ发展到宫颈澎，而目前 宫颈癌筛查主要通过宫颈脱落细胞学检查及ＦＩＰＶ 检测，两者均有一定局限性。因此，有必要寻找新的 ?基金项目：卫生部科研基金课题（编号：ＷＫＪ２００７—３—００１） ．—～５３３?－—— 万方数据 换页 赣南医学院学报２０１０年 指标来协助诊断官颈癌前病变，以提高筛查的准确 性和可预测性，以早期发现ＣＩＮ向浸润性宫颈癌的 发展。人端粒酶ＲＮＡ（ｈＴＥＲＣ）是人端粒酶组分之 一，有研究证实，端粒酶激活是ＨＰＶ整合入宫颈细 胞后，上皮内瘤变（ＣＩＮ）向宫颈癌转化的关键步 骤…。本研究通过荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉ． ｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）法检测官颈脱落细胞学涂片 中ｈＴＥＲＣ基因，探讨ｈＴＥＲＣ基因在ＣＩＮ和宫颈鳞 癌（ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａｓｏｆｔｈｅｃｅｒｖｉｘ，ＳＣＣ）的表达 及其临床意义。 １资料和方法 １．１资料来源收集２００８年１月至２００８年１０月 东莞地区１００例患者的官颈脱落细胞标本。患者年 龄２０一６５岁，平均（３６．５土１０．４）岁，均为已婚或有 性生活妇女。依据ＣＩＮ处理指南，对异常细胞学进 行高危ＨＰＶ—ＤＮＡ检测和阴道镜检查，并经阴道镜 取活检，常规送病理检查。 １．２涂片判断标准和分组根据ＴＢＳ（ｔｈｅｂｅｔｈｅｓｄａ ｓｙｓｔｅｒｍ）２００１年阴道／宫颈细胞学诊断系统进行细 胞学诊断。按细胞学分组分为正常或炎症细胞涂片 组、ＡＳＣＵＳ组、ＬｓＩＬ组和ＨＳＩＬ组。所有ＦＩＳＨ检测 用涂片，经１０％抽样，并由本科细胞学医师诊断，和 其细胞学涂片结果对照，符合率为１００％。依据组 织学的病理结果分为正常或炎症组、ＣＩＮＩ组、ＣＩＮ Ⅱ／Ⅲ组和鳞状细胞癌（ＳＣＣ）组。 １．３细胞标本采集 用薄层液基细胞学宫颈刷插 人宫颈口，在宫颈外口鳞柱状上皮交界处，以宫颈外 口为中心，均匀旋转３—５周，取出宫颈刷。 １．４制作方法用ＴＣＴ低渗制片，将ＴＣＴ保存液 瓶中剩余的液体（＞５ｍＬ），Ｉ５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ， 加胶原酶Ｂ，３７℃水浴２０ｒａｉｎ，再离心，加５ｍＬ去 离子水３７％水浴２０～４０ｒａｉｎ，生理盐水液漂洗沉 渣，重复２次；加２－５ｍＬ３７％ＫＣＩ低渗液重新吹打 悬浮细胞，置３７℃水浴箱中孵育２０ｍｉｎ，离心、加入 ５ｍＬ固定液（甲醇：冰乙酸３：１）固定１０ｒａｉｎ。离 心后弃上清，将细胞滴于玻片制片。 １．５ＦＩＳＨ法ｈＴＥＲＣ基因检测 （１）探针：ｈＴＥＲＣ 探针由北京金菩嘉医疗科技公司提供，为ｈＴＥＲＣ／ ＣＳＰ３ＤＮＡ探针，ｈＴＥＲＣ基因位于３ｑ２６．３，此区域包 含人类端粒酶基因的ＲＮＡ组分，模板由１１个核苷 酸组成，序列５７一ＣＵＡＡＣ—ＣＣＵＡＡＣ一３ｈＴＥＲＣＤＮＡ 探针杂交到３号染色体长臂２６．３，荧光信号为红色 （四甲基罗丹明），ＣＳＰ３ＤＮＡ杂交到３号染色体着 ．－——５３４．．．。 丝粒（３ｐｌＩ．１一ｑ１１．１），荧光信号为绿色（细胞绿）， ＣＳＰ３作为对照探针，ｈＴＥＲＣ作为检测探针；（２）涂 片预处理：涂片置于２ＸＳＳＣ（ｐＨ７．０）５ｒａｉｎ×２， ０．１ｍｏＶＬＨＣＩ１—２ｒａｉｎ。０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣＬ和胃蛋白 酶混合液２ｍｉｎ，室温下ｌ×ＰＢＳ洗脱３次，７０％、 ８５％和１００％乙醇梯度脱水固定，自然干燥；（３） ＦＩＳＨ操作步骤：避光环境中，玻片和探针混合液 （７“Ｌ杂交缓冲液、ｌ斗Ｌ去离子水和２弘Ｌ探针），在 ７０％甲酰胺＋２×ＳＳＣ变性液中，（７３±１）℃变性 ５ｒａｉｎ，用一２０℃预冷的７０％、８５％和１００％乙醇梯 度脱水３ｒａｉｎ，玻片自然干燥，置人４５—５０℃烤片机 预热后与探针杂交，１０肛Ｌ探针混合液滴于杂交区 域，加盖盖玻片，封片，４２％保温箱过夜杂交。次日 玻片洗脱：移去盖玻片，４６℃下玻片置于５０％甲酰 胺＋２ ｘＳＳＣ混合溶液，１０ｒａｉｎ×３，再置于２×ＳＳＣ 溶液１０ｒａｉｎ，最后于２×ＳＳＣ＋０．１％ＮＰ４０混合溶液 中５ｍｉｎ。玻片干燥后加１６ｔｒＬＤＡＰＩ复染液，放于 暗盒复染４５～６０ｒａｉｎ。 １．６ＦＩＳＨ信号的判断 （１）用ＯＬＹＭＰＵＳＢ×５１ 荧光显微镜在ＤＡＰＬ／ＦＩＦＣ／ＴｅｘａｓＲｅｄ三色滤光镜激 发下观察间期细胞荧光杂交信号，用ＶｉｄｅｏＴｅｓｔ公司 提供的ＦＩＳＨ分析软件分析图像，评估整个涂片的 ＣＳＰ３和ｈＴＥＲＣ基因双色探针杂交情况。（２）判断 标准：选取２０例正常宫颈细胞涂片，每例切片至少 分析１００个检测细胞，统计正常宫颈细胞涂片上皮 细胞中出现绿：红＜２：２的百分比，超过平均百分 值＋３个标准差则可诊断为ｈＴＥＲＣ基因有扩增。 统计各组宫颈病例中各种异常信号细胞的百分率。 按观察到的信号数记录为ＣＳＰ３信号数：ｈＴＥＲＣ信 号数，二倍体记录为２：２，ｈＴＥＲＣ异常信号的各种 类型记录为２：３，２：４，３：３，４：４及其他等。 １．７统计学处理用ＳＰＳＳ１３．０软件进行统计学 分析，比较各级病变ｈＴＥＲＣ的表达，采用ｘ２检验， 检验标准ｄ＝０．０５。 ２结果 ２．１正常宫颈细胞ｈＴＥＲＣ基因杂交信号分布情况 以２０例正常富颈病例作为正常对照并确立阈值， 每例样本计数１００个，ｈＴＥＲＣ基因杂交信号（ｎ）分 布情况如下：列入计数的２０００个细胞中，以绿：红 荧光信号为２：２为主（９０．５５％），部分患者出现２ ：３（６．９％）。２：４（０．７％），３：３（Ｏ．９％）。４：４ （０．２５％）及其他（ｏ．７％）类型信号。按照上述杂交 信号的结果判定方法：以正常宫颈脱落上皮中 万方数据 换页 ４期 卢义生，等ＦＩＳＨ检测子宫颈脱落细胞ｈＴＥＲＣ基因的表达及意义 ｈＴＥＲＣ基因杂交信号为标准确定，１１≥３的细胞百分 值Ｍｅａｎ＝１．７５ＳＤ：Ｉ．４９ｍｅａｎ４－３ＳＤ＝ｌＩ．６７，多体 型（ｎ≥３）百分比上限为１１．６７，大于此上限者可认 为ｈＴＥＲＣ基因有扩增。 ２．２ＣＩＮ患者宫颈脱落细胞ｈＴＥＲＣ基因的表达 可用于分析结果的宫颈细胞学涂片共１００例，其中， 正常或炎症组涂片３０例，异常细胞学涂片７０例，后 者包括ＡＳＣＵＳ４１例，ＬＳＩＬ３６例，ＨＳＩＬ２１例。细胞 学与组织学的情况，见表Ｉ。１００例涂片组织学分组 ｈＴＥＲＣ基因表达见表２。正常或炎症组ｈＴＥＲＣ基 因阳性率为Ｏ％（０／３０例），ＣＩＮＩ、ＣＩＮＩＩ／ｌｌＩ、ＳＣＣ 组与正常组比较，ｈＴＥＲＣ基因阳性率有显著差异（Ｐ ＜０．００１）。其中ＣＩＮＩ与ＣＩＮⅡ／Ⅲ，ＣＩＮＩＩ／Ⅲ与 ＳＣＣ差异有显著统计学意义（Ｐ＜０．０１），随组织学 病变程度增加，ｈＴＥＲＣ基因阳性率增加。 表ｌ组织学各组的细胞学情况ｎ（％） 表２组织学各组ｈＴＥＲＣ基因表达情况 纽别 正常或炎症 ＣＩＮＩ ＣＩＮＩＩ／ｎｌ ＳＣＣ ｎ 辟ｊ性 ３００ ３３５ ３０２６ ７７ ％ ０ １５．１５ ８６．６７ １００ 细胞学各组ＡＳＣＵＳ、ＬＳＩＬ与ＨＳＩＬ组和正常组比 较，ｈＴＥＲＣ基因阳性率差异有显著统计学意义（Ｐ＜ ０．００１），随细胞学病变程度增加，ｈＴＥＲＣ基因阳性 率增加，其中ＡＳＣＵＳ与ＨＳＩＬ组比较，有显著统计学 意义（Ｐ＜０．０５），ＬＳＩＬ和ＨＳＩＬ组比较，有显著统计 学意义（Ｐ＜０．０５），见表３。 表３细胞学各组ｈＴＥＲＣ基因的表达 ｎ 阳性 ２ ０ ４１ ９ ３６ １０ ２ｌ１９ ％ Ｏ ２２．Ｏ ２７．７８ ９０．４８ ２．３ｈＴＥＲＣ基因预测ＣＩＮⅡ／Ⅲ的每吏感度和特异度 ｈＴＥＲＣ检测ＣＩＮｎ／ＩｌＩ敏感度、特异度、阳性预测 值和阴性预测值分别是８６．６７％、９２．０６％、８３．８７％ 和９３．５３％。 ２．４ｈＴＥＲＣ基因扩增类型ＣＩＮ和ＳＣＣ组病例与 正常组比较，ｈＴＥＲＣ基因异常扩增增加。正常组的 宫颈细胞中，３号染色体ｈＴＥＲＣ基因多表达为两个 杂交信号，而ＣＩＮ和ＳＣＣ组常可观察到明确的超二 倍体现象，扩增类型多为（ＣＳＰ３：ｈＴＥＲＣ）２：３，、２ ：４、３：３、４：４等类型，见图ｌ、图２。分布情况 见表４。 表４组织学各组ｈＴＥＲＣ基因扩增类型 ３讨论 ３．１端粒酶与ｈＴＥＲＣ的结构和生物学特性人类 染色体端粒酶是由ＲＮＡ和蛋白质组成的依赖ＲＮＡ 的ＤＮＡ聚合酶，能以自身携带的ＲＮＡ为模板，以３’ 端粒为引物来合成端粒ＤＮＡ，其功能是维持真核细 胞染色体末端端粒的长度，具有保护染色体末端波 降解以及和其他染色体连接的作用。端粒酶由人端 粒ＲＮＡ亚单位（ｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅＲＮＡ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ， ｈＴＥＲＣ）、人端粒酶逆转录酶的蛋白亚单位（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ，ｈＴＥＲＴ）和相关蛋白 ｌ（ＴＥＰｌ）３个部分组成。其中ｈＴＥＲＣ为端粒酶的 主体结构，同时具有逆转录合成人端粒ＴＴＡＧＧＧ重 复序列的功能［２】，ｈＴＥＲＴ常常只在增殖的细胞中表 达。正常体细胞的端粒是随着有丝分裂次数的增加 而逐渐缩短，当端粒缩短到一定程度时，细胞停止分 裂，进入衰老期，当端粒酶活化时，端粒不再继续缩 短而保持平衡状态，使细胞无限制分裂繁殖。因此， 端粒酶的活化是细胞永生化或恶性化的重要事件。 ３．２ｈＴＥＲＣ基因异常与宫颈病变的相关性在对 宫颈病变的研究中，宫颈细胞由ＣＩＮ向宫颈癌转变 的过程中几乎都伴有３号染色体长臂的扩增，其中， 所涉及最重要的基因可能是人染色体端粒酶基因。 Ｈｅｓｅｌｍｅｙｅｒ—Ｈａｄｄａｄ等…采用ＦＩＳＨ三色探针检测宫 颈涂片ｈＴＥＲＣ基因，发现ＬＳＩＬ中ｈＴＥＲＣ基因阳性 率占７．１４％，ＨＳＩＬ占７６％，四倍体细胞数和ｌａＴＥＲＣ ．—一５３５，．一 一症～炎 ～或坶 塑脯删吼吼 万方数据 换页 赣南医学院学报２０１０年 基因扩增随细胞学病变的严重程度增加，认为检测 ｈＴＥＲＣ可作为预测高度病变（ＨＳＩＬ）的指标，随访这 些病例ｌ一３年后，ｈＴＥＲＣ扩增病例中，ＣＩＮＩ／Ⅱ进 展到ＣＩＮⅢ者多于阴性病例，表明特异的基因组改 变是ＣＩＮ发展到浸润癌所必需的Ｈｊ。２００３年Ｋｅｒ． ｓｔｉｎ等Ｈ１采用ＦＩＳＨ技术检测宫颈涂片中的 ３ｑ２６ｈＴＥＲＣ基因，发现四体型细胞数和ｈＴＥＲＣ基囚 随细胞学病变的严重程度而增加。２００８年Ｎａｎｃｙ 等¨’通过ＦＩＳＨ分析了６６例不同级别的宫颈液基 制片后发现，ｈＴＥＲＣ基因的表达在ＨＳＩＬ／ＳＣＣ组与 正常／ＡＳＣＵＳ组问差异有统计学意义，ＨＳＩＩＭＳＣＣ组 基因扩增的百分率明显高于正常／ＡＳＣＵＳ组。我们 对１００例患者进行分析发现，３３例ＣＩＮＩ中ｈＴＥＲＣ 基因扩增阳性率为１５．１５％，３０例ＣＩＮⅡ／１１为 ８６．６７％，７例ＳＣＣ为１００％，随着病变升级，ｈＴＲＥＣ 基囚扩增比例增加。Ｏｌａｈａｒｓｋｉ【６１用双色荧光原位杂 交法研究ＡＳＣＵＳ、ＬｓＩＬ和ＨＳＩＬ患者的宫颈涂片，显 示３号染色体四倍体和非整倍体发生频率增加，且 随病变进展，非整倍体发生频率增加明显，出现三倍 体的特殊类型。在本研究中，随着病变升级，ｈＴＲＥＣ 基因异常扩增增加，也可观察到明确的超二倍体现 象，同时发现，与正常宫颈相比，ＣＩＮ中出现了四体 型与多体型，并随着病变进展，异倍体比例增加。由 此可见，宫颈癌和ＣＩＮ常见染色体增加、缺失等非 整倍体染色体不稳定现象，ｈＴＥＲＣ基因异常的染色 体不稳定性与宫颈癌的发生关系密切，３ｑ染色体不 稳定可能是宫颈癌前病变发展到宫颈癌的因素之 ’。一Ｏ ３．３在宫颈细胞涂片中，检测ｈＴＥＲＣ基因的意义 目前宫颈癌的早期筛查主要依靠液基细胞学检查 结果，细胞学检查是一种形态学检查，受取材、制片 质量和判读者主观因素影响较大。液基细胞学检查 提示ＡＳＣＵＳ、ＬＳＩＬ较多，这些病例经阴道镜检查可 能未发现异常，但在随访的过程中病情进展迅速，甚 至很快发展成浸润性癌，这可能与病变位于子宫颈 管有关，而阴道镜不能发现１４％的子宫颈管内病变 及２５％～３０％的微小浸润癌。而ｈＴＥＲＣ基因在宫 颈病变的早期表达，成为宫颈病变早期诊断的新靶 点，其含量随病变的发展而进行性发展，ｈＴＥＲＣ基 因检测对于子宫颈癌前病变的早期诊断和筛查具有 重要的临床价值。ＦＩＳＨ方法操作相对简单，稳定性 较好，不需要细胞培养，可在早期发现少量病变细胞 遗传学异常。用ＦＩＳＨ方法，在常规收集的宫颈细 ．－－——５３６－—－—— 胞中检测ｈＴＥＲＣ基因的扩增和染色体３着丝粒，使 染色体的非整倍体客观上可见，成为可用的检测方 法。ＨｅｓｅｌｍｅｙｅｒＨａｄｄａｄ等ｐ１报道ＦＩＳＨ方法ｈＴＥＲＣ 基因检测预测ＣＩＮＩ／Ⅱ进展到ＣＩＮｍ的敏感性是 １００％，特异性是７０％，表明检测ｈＴＥＲＣ基因可作为 预测ＣＩＮｌＩ／ＩＩＩ发展到宫颈癌的指标，可以早期发现 癌前病变发展到官颈癌的危险几率，为宫颈癌提供 了一种有用的生物遗传学监测指标。本研究 ｈＴＥＲＣ基因诊断ＣＩＮＩＩ／Ⅲ的特异度和阴性预测值 较高，具有一定的临床应用价值。 综上所述，采用ＦＩＳＨ方法检测端粒酶ｈＴＥＲＣ 基因的表达，可以早期发现发生癌变的趋势，可作为 预测宫颈病变发展到宫颈癌的生物遗传学监测指 标，并有望成为宫颈癌早期筛查方法，其在肿瘤的研 究及临床方面具有广阔的应用前景。 （本文图片见封二） 参考文献： ［１］Ｈｏｓｅｌｍｅｙｅｒ－ＨａｄｄａｄＫ，ＪａｎｚＶ，ＣａｓｔｌｅＰＥ，ｅｔａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆｇｅｎｏｍｉｃａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｇｅｎｅ （ＴＥＲＣ）ｉｎｃｙｔｏｌｏｇｉｃｓｐｅｃｉｍｅｎｓａｓ ａｇｅｎｅｔｉｃｔｅｓｔｆｏｒｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃｅｒｖｉｃａｌｄｙｓｐｌａｓｉａ［Ｊ］．ＡｍＪｏｆＰｍｈｄ，２００３。 １６３：１４０６—１４１６． ［２］ＦｅｎｇＪ，ＦｕｎｋｗＤ，ＷａｎｇＳＳ，ｃｔａ１．ｔｈｅＲＮＡｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｃ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，２６９（７）：１２３６—１２４１． ［３］ｔｔｅｓｅｌｍｅｙｅｒ－ＨａｄｄａｄＫ，ＳｃｍｍｅｒｆｅｌｄＫ，ＷｈｉｔｅＮＭ，ｅｔａ１． Ｇｅｎｏｍｉｃａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｇｅｎｅ （ＴＥＲＣ）ｉｎｐａｐｓｍｅａ昭ｐｒｅｄｉｃｔｓｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃｅｒ－ ｄｅａｌｃａｎｅｒ［Ｊ］．ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２００５，１６６：１２２９—１２３８． ［４］ＫｅｒｓｔｉｎＨＨ，ＶｉｋｔｏｒＪ，ＰｈｉｌｉｐＥ，ｅｔａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｍｉｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｇｅｎｅ（ｈＴＥＲＣ）ｉｎ ｅｙｔｄｏｒｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓａｓ ａｇｅｎｅｔｉｃｔｅｓｔｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌｄｙｓｐｌａｓｉａ［Ｊ］．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ。 ２００３，１６３：１４０６—１４１６． ［５］ＮａｎｃｙＰ，ＣａｒａｗａｙＡＫ，ＭａｒｉｌｙｎＤ，ｅｔａ１．Ｇａｉｎｏｆｔｈｅ３ｑ２６ ｒｅｇｉｏｎｉｎｃｅｒｖｉｃｏｖａｇｉｎａｌｌｉｑｕｉｄ—ｂａｓｅｄｐａｐｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｑｕａｍｏｔｍｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｅｓｉｏｎｓａｎｄｓｑｕａ－ ｍｏｌｌｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＧｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃＯｎｅｄｏｇｙ，２００８， ｔ１０：３７－４２． ［６］ＯｌａｈａｒｓｋｉｌＡＪ。ＳｏｔｅｌｏＲ，Ｓｏｌｏｍａ—Ｌ岫ａＧ，ｅｔａ１．Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｙ ａｎｄｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙａｒｅｅａｒｌｙｅｖｅｎｔｓｄｕｒｉｎｇｃｅｒｖｉ? ｃａｌｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２００６，２７：３３７— ３４３． （收稿日期：２０１０—０６一０２） 万方数据 换页

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